Jelentős változáson esett át e téren a játék, hisz egyszerre két karakter közül választhatunk. A párok ugyan előre meg vannak adva, de a párosítás tetszés szerint kombinálható. A karkaterek mellett a speciális fegyvereik is be lesznek mutatva.

Karakterek három csoportra lesznek osztva. Könnyű, közepes és nehéz súlyú. Először a 16 alapból választható karakter kerül bemutatásra, majd a 4 rejtett karakterről is szó lesz.

Mario: Mi ez a piros kék villám amibe beleütköztél? Persze, hogy Mario. Ne kerülj túl közel hozzá, különben nem csak a port dörzsöli az orrod alá! (közepes)
Luigi: Talán félénknek látszik, de ne becsüld alá Luigit! Nem fél attól, hogy kiüssön az útból a halálos zöld tűzgolyóival. (közepes)
Speciális fegyver: Mikor Mario és Luigi kieresztik a tüzes támadásukat, öt tűzgolyó fog végigpattogni a pályán, elsöpörve mindent és mindenkit aki az útjába kerül. Előre és hátra dobható.

Donkey Kong: Milyen gyors Donkey Kong? Csak nézd meg a talpát! Ha ezzel rátapos a gázpedálra akkor nincs megállás! (nehéz)
Diddy Kong: Még sosem láttál majmot így vezetni. Diddy Kong egy szabad stílusú vezető aki dzsungelt hozza el a versenyzésbe. (könnyű)
Speciális fegyver: Donkey és Diddy Kond bárki járgányát megpörgeti az ő óriás banánhéj támadásukkal. A szűkebb pályákon a nagy gyümölcsöt szinte lehetetlen kikerülni, és ha egy kocsi egyszer beleütküzik akkor 3 átlagos banánra robban szét. Előre és hátra dobható.

Wario: Wario kétségtelenül a Gomba Királyság legagresszívabb sofőrje. Vigyázz ha a közeledben látod!
Waluigi: Kétszer is gondold meg mielőtt közel mész Waluigihoz. Ő egy természetesen alattas karakter. A speciális támadása valósággal kirobbant a helyedről.
Speciális támadás: A Bob-omb egy halálos fegyver, de nehéz a mesterévé válni. Wario és Waluigi képes ezeket előre és hátra dobni, hatalmas robbanást okozva ezzel és minden közelében lévő elveszti a cuccait. De légy óvatos! Könnyű belehajtani a saját robbanásodba.

Yoshi: Nem lehet megállni nevetés nélkül ha meglátod Yoshit. De ha kiüt a zöld tojásával akkor ő fog nevetni rajtad.
Birdo: Talán megkérdezed magadtól: Ki Birdo? Pedig könnyű. Ő az, aki kiüt a rózsaszín tojással.
Speciális fegyver: Yoshi/Birdo tojás. Talán ártatlannak tűnik de valójában egy igazi lövedék egy kis csavarral. Nem csak tökéletesen kipécézi az áldozatát, de miután eltalálta azt három cucc esik ki belőle ami segíthet téged, de akár az ellenfeledet is. Előre és hátra dobható.

Peach: Nem fogod Peachet azon kapni, hogy a visszapillantóban sminkel. Ha ez a lány a kormány mögé kerül akkor csak a vezetéssel foglalkozik.
Daisy: Akik azt mondják, hogy a lányok nem tudnak vezetni, még nem találkozott Daisyvel. Gyors, bátor és nem fél félrelökni ha el akarsz menni mellette.
Speciális fegyver: Szív. Peach és Daisy használhatja a játék legjobb védekező cuccát. A két szív a kocsi körül fog pörögni és védi azt a támadásoktól. A szív pedig átváltozik azzá a támadó cuccá ami megtámadott volna, amit te pedig használhatsz.

Bowser: Bowser új jelentést ad az úti randalírozásnak. A vezetési stílusa tökéletesen egyezik a tüzes temperamentumával.
Bowser jr.: Bár kissebb mint az apja, de ő is ugyanolyan gonosz és robbanákony mint a nagyobb verziója. Komoly fájdalmat tud okozni.
Speciális fegyver: Bowser teknő. Mintha csak rájuk öntötték volna ezeket az óriás, tüskés teknőket. Mindenkiben félelmet kelt ez az össze-vissza pattogó teknő. Előre és hátra dobható.

Koopa: Bowser örök hű alattvalója, de erről megfeledkezik a versenyben, és akár rá is támad!
Paratroopa: Nagyon vigyáz a szárnyaira, nehogy letörjön!
Speciális fegyvereik: Tripla-teknő. Amíg Koopával és Paratroopával vagy, addig nem kell félni, hogy nem lesz elég teknőd, hisz hármat is kapsz egyszerre!

Baby Mario: Mario és Baby Mario ugyanabban a játékban! Az időutazás csodája!
Baby Luigi: Sokkal szégyenlősebb, mint a bátyja, hisz ez az első játék, amiben szerepel.
Speciális fegyvereik: Láncos Csámcsi. Ez a félelmetes szörny a kocsik után megy, és mindenkit levesz a lábáról!

Toad: Toad kicsi, gyors és a super gombájával hatalmas turbót tud adni bármelyik járgánynak. Nyisd meg őket a 100cc-s speciális kupa megnyerésével.
Toadette: Ha szükséget érzel egy kis sebességre akkor válaszd Toadette-et és kapaszkodj!
Speciális fegyver: Arany gomba. Egy bizonyos időre végteleg mennyiségű gomba erejével ér fel.

Petey Piranha: Petey Piranha képes bármilyen speciális fegyver felvételére. Hogy felnyisd őket, nyerd meg a tükör csillag kupát.
King Boo: Ha nem félsz a szellemektől akkor King Boo remek választás lesz neked.
Speciális fegyver: Petey és King Boo képesek bármelyik speciális fegyvert felvenni.